基因敲除
通过基因组编辑技术等手段，将目标基因的DNA序列从细胞或生物体中彻底删除或失活，阻断其转录和翻译过程，使目标基因完全失去功能，同时还可获得与基因敲低不同的表型。常见的基因敲除技术包括CRISPR/Cas9系统、转录激活样效应核酸酶（TALEN）技术、锌指核酸酶（Zinc finger nuclease）技术等。基因敲除技术通常能够取得更明显的表型，对于探究基因作用、疾病机制、药物靶点等方面具有更高的研究效度。
基因敲除载体：
（1）CRISPR/Cas9载体：包含Cas9核酸酶和sgRNA靶向序列，通过精确定位靶向基因DNA序列并引入双链断裂点，从而实现靶向基因的突变和敲除；
（2）转录激活样效应核酸酶（TALENs）载体：与CRISPR/Cas9类似，包含特异性核酸酶和nuclease binding domain，通过切割靶向基因DNA序列实现敲除和编辑；
（3）锌指核酸酶（ZFNs）载体：包含具有特异性的锌指结构域和核酸酶，通过切割靶向基因DNA序列实现敲除和编辑。
基因敲除载体的构建方法：
（1）设计基因敲除的靶点以及合成序列，选择CRISPR/Cas9等酶切工具对目标基因进行精确编辑，实现敲除；
（2）将编辑过的靶点序列插入到特定的载体中；
（3）转化编制好的敲除载体至大肠杆菌中，进行筛选鉴定，验证敲除效果；
（4）最终通过病毒载体、电穿孔等方法将敲除载体导入到目标细胞中。